Fusi Gen ansB Dengan Promoter Sintetik pSSPM3 ke Dalam Vektor Ekspresi pET-28a+ Untuk Pengembangan Terapi Target Acute Lymphoblastic Leukemia

Lisana, Shiddiqin Aliya (2025) Fusi Gen ansB Dengan Promoter Sintetik pSSPM3 ke Dalam Vektor Ekspresi pET-28a+ Untuk Pengembangan Terapi Target Acute Lymphoblastic Leukemia. S1 thesis, Universitas Andalas.

Abstract

Acute Lymphoblastic Leukemia (ALL) adalah kanker darah yang ditandai oleh produksi limfoblas abnormal. Salah satu terapi target yang dikembangkan untuk mengobati ALL adalah enzim L-asparaginase II, yang menghidrolisis asam amino asparagin menjadi aspartate dan ammonia, sehingga menghambat pertumbuhan sel leukemia. Serratia plymuthica UBCF_13 diketahui memiliki gen ansB yang mengkode enzim ini. Untuk meningkatkan produksi L-asparaginase II dengan biaya yang lebih rendah, dilakukan penggabungan promoter sintetik pSSPM3 dengan gen ansB ke dalam vektor ekspresi pET-28a+ dan mengklon plasmid rekombinan ini dalam sistem bakteri E. coli. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimen dengan tahapan utama: menyisipkan promoter sintetik pSSPM3 ke dalam plasmid pET-28a+ yang diverifikasi menggunakan PCR, mendigesti gen ansB dari plasmid pGEM T Easy:ansB dan dianalisis menggunakan elektroforesis, menyisipkan gen ansB ke dalam plasmid rekombinan pET-28a+: pSSPM3 dan diverifikasi kembali menggunakan PCR, serta mentransformasikan dan mengkloningnya dalam E. coli dilanjutkan dengan verifikasi menggunakan PCR serta digesti. Hasil elektroforesis menunjukkan keberhasilan ligasi promoter pSSPM3 dengan pET-28a+ dengan pita DNA berukuran 674 bp. Digesti gen ansB berhasil dilakukan dengan adanya pita DNA berukuran 1.057 bp. Penyisipan gen ansB dikonfirmasi melalui pita DNA berukuran 1.682 bp. Transformasi dan kloning plasmid pET-28a+: pSSPM3:ansB dalam E. coli BL21 berhasil diverifikasi melalui PCR dan digesti. Kesimpulan penelitian ini adalah fusi gen ansB dengan promoter sintetik pSSPM3 ke dalam vektor ekspresi pET-28a+ dan transformasi serta kloning plasmid rekombinan pET-28a+: pSSPM3:ansB ke dalam bakteri E. coli BL21 berhasil dilakukan. Diharapkan, penggunaan promoter sintetik pSSPM3 dapat meningkatkan ekspresi gen ansB dibandingkan dengan promoter T7 pada plasmid pET-28a+.

Actions (login required)

View Item